LE ALTERAZIONI DEL GENE VHL PROMUOVONO LA PROGRESSIONE TUMORALE NEL CARCINOMA RENALE A CELLULE CHIARE INTRACAPSULARE MEDIANTE LA LOCALIZZAZIONE NUCLEARE DEL HIF1 ALFA

SCOPO DEL LAVORO: Le alterazioni del gene VHL inibiscono l'abilità delle pVHL di legarsi a HIF1alfa con conseguente iperespressione di HIF1alfa. L'espressione di HIF1alfa è regolata dal livello di O2. In condizioni normali di ossigeno pVHL lega HIF1alfa, dopo idrossilazione nell'ODD (oxygendependent degradation domain) e questo permette la degradazione di HIF1alfa. In questo dominio è localizzato un SNP (single nucleotide polymorphism) al codone 582. In condizioni di ipossia, l'interazione VHL/HIF1alfa viene abolita e HIF1alfa attiva i suoi geni target a livello nucleare. Lo scopo dello studio è stato di caratterizzare lo stato molecolare di VHL e del SNP di HIF1alfa in una ampia popolazione di ccRCC intracapsulari. Inoltre abbiamo valutato l'impatto prognostico delle alterazioni geniche di VHL e HIF1alfa e dei loro prodotti proteici. MATERIALI E METODI: Sono stati studiati 136 pazienti con ccRCC intracapsulare (pT1a, pT1b, pT2), età media 62 anni, sottoposti a nefrectomia radicale nel periodo 19912001. Followup medio 117 mesi. Per lo studio immunoistochimico è stato costruito un tissue microarray e sono stati utilizzati due anticorpi monoclonali anti pVHL(clone Ig32 e clone Ig33) e un anticorpo policlonale antiHIF1alfa. Sono state eseguite inoltre l'analisi mutazionale dell'intero gene VHL, la valutazione del SNP (C1772T) di HIF1alfa, l'analisi dello stato di metilazione del promoter di VHL e LOH (loss of heterozygosis) al locus 3p25 di VHL. I risultati sono stati correlati con la sopravvivenza tumore specifica. RISULTATI: Le alterazioni del gene VHL sono state evidenziate nel 57% dei casi. Le mutazioni di VHL, metilazione e LOH sono state evidenziate nel 51%, 11% e 17% dei casi. I pazienti con alterazioni bialleliche di VHL hanno evidenziato una riduzione statisticamente significativa della sopravvivenza tumore specifica (p=0.01). Abbiamo evidenziato inoltre una associazione statisticamente significativa tra alterazione biallelica di VHL, l'assenza di espressione di pVHL (p=0.004) e la localizzazione nucleare di HIF1alfa (p=0,04). SNP era associato con la sola localizzazione citoplasmatica di HIF1alfa (p=0.007). La negatività di pVHL (p=0.001) e la positività nucleare di HIF1alfa (p=0.005) erano statisticamente correlate con una minore sopravvivenza tumore specifica. DISCUSSIONE: La valutazione dell'impatto prognostico delle mutazioni di VHL ha evidenziato risultati contrastanti e pochi studi hanno analizzato le alterazioni di HIF1alfa nel ccRCC. Le alterazioni di VHL e HIF1alfa influenzano l'espressione e la localizzazione dei prodotti proteici da loro codificati. Le alterazioni bialleliche di VHL con perdita di espressione di pVHL sono associate ad una localizzazione nucleare di HIF1alfa ed ad una prognosi infausta nei ccRCC intracapsulari. MESSAGGIO CONCLUSIVO: Le alterazioni del pathway pVHL/HIF1alfa rappresentano un evento iniziale nella carcinogenesi del ccRCC e sono coinvolte nella progressione tumorale attraverso la localizzazione nucleare di HIF1alfa.